Menghitung Angka Kuman Metode Pour Plate

A.    Perhitungsn angka kuman

Menghitung atau menentukan banyaknya mikroba dalam suatu bahan (makanan, minuman, dan lain-lain) dilakukan untuk mengetahui sampai seberapa jauh bahan itu tercemar oleh mikroba. Dengan mengetahui jumlah mikroba, maka dapat diketahui kualitas mikrobiologi dari bahan tersebut. Bahan yang dapat dikatakan baik jika jumlah mikroba yang terkandung dalam bahan tersebut masih di bawah jumlah standar yang ditentukan oleh suatu lambaga. Kandungan mikroba pada suatu bahan juga sangat menentukan tingkat kerusakannya, serta dapat ditentukan oleh tingkat kelayakan untuk dikonsumsi.

Jumlah mikroba dalam suatu  bahan dapat dihitung menggunakan beberapa cara. Namun secara garis besar dibedakan menjadi :

1.    Cara perhitungan langsung

Cara perhitungan langsung berarti kita dapat mengetahui beberapa jumlah mikroba pada saat dilakukan perhitungan. Hasil perhitungan secara langsung menunjukkan seluruh jumlah mikroba yang masih hidup maupun yang sudah mati. Adapun caranya:

a.       Pembuatan preparat sederhana yang diwarnai

b.      Menggunakan ruang hitung

2.      Cara perhitungan tidak langsung

Cara perhitungan tidak langsung, hasil perhitungan jumlah mikroba baru dapat diperoleh kemudian setelah dilakukan perlakuan terlebih dahulu. Hasil perhitungan tidak langsung akan menunjukan jumlah mikroba yang masih hidup saja. Adapun caranya :

a.       Menghitung jumlah total mikroba (Total plate count = angka lempeng total)

b.      Cara pengenceran

c.       Memperkirakan jumlah terkecil mikroba yang ada (MPN = Most Probable Number)

d.      Cara kekeruhan (turbiditas)

Metode tuang atau pour plate dilakukan dengan 2 cara, yaitu dengan mencampur suspensi bakteri dengan medium agar pada suhu 50ºC kemudian menuangkannya pada petridisk atau dengan menyemprotkan suspensi pada dasar petridisk, kemudian menuang medium agar keatasnya dan diaduk. Setelah agar mengeras, bakteri akan berada pada tempatnya masing-masing dan diharapkan bakteri tidak mengelompok sehingga terbentuk koloni tunggal.

Metode gores atau streak plate menggunakan loop ose dan menggoreskannya ke permukaan medium agar dengan pola tertentu dengan harapan pada ujung goresan, hanya sel-sel bakteri tunggal yang terlepas dari ose dan menempel ke medium. Sel-sel bakteri tunggal ini akan membentuk koloni tunggal yang kemudian dapat dipindahkan ke medium selanjutnya agar didapatkan biakan murni.

Metode sebar atau spread plate dilakukan dengan menyemprotkan suspensi ke atas medium agar kemudian menyebarkannya secara merata dengan trigalski. Dengan ini diharapkan bakteri terpisah secara individual, kemudian dapat tumbuh menjadi koloni tunggal.

Metode pemaparan pada udara terbuka adalah metode untuk mengisolasi bakteri udara. Metode ini sangat simpel, yaitu dengan memaparkan medium pada udara terbuka, dengan harapan ada bakteri yang menempel dan kemudian akan tumbuh menjadi koloni.


 Dalam pour plate, sejumlah kecil inokulum dari kultur kaldu ditambah dengan pipet ke pusat cawan petri. Didinginkan, tapi masih cair, media agar dalam tabung reaksi atau botol kemudian dituangkan ke dalam cawan Petri. Hidangan tersebut kemudian diputar dengan lembut, atau bergerak maju-mundur (NS pertama, kemudian NW-SE, maka NE-SW), untuk memastikan bahwa budaya dan menengah secara menyeluruh dicampur dan menengah mencakup piring merata.Tuangkan piring memungkinkan mikroorganisme untuk tumbuh baik di permukaan dan di dalam medium. Sebagian besar dari koloni tumbuh dalam media dan dalam ukuran kecil dan mungkin konfluen. Beberapa daerah koloni yang tumbuh di permukaan adalah dengan ukuran yang sama dan penampilan sebagai orang-orang di piring beruntun.Lempeng ini kemudian dapat digunakan untuk menguji anti-mikroba efek dari berbagai zat. Untuk informasi lebih lanjut lihat Investigasi tindakan antimikroba.Jika tidak, piring seperti ini bisa menjadi bagian dari penyelidikan dari populasi bakteri dalam sampel. Kultur pengenceran seri dengan cara ini memungkinkan perhitungan ukuran populasi dari sampel bakteri. Jika pengenceran dan volume inokulum, biasanya 1 cm3, diketahui, jumlah layak dari sampel per cm3 dapat ditentukan. Hitungan yang layak adalah jumlah bakteri atau rumpun bakteri per cm3. Para pengenceran yang dipilih harus menghasilkan antara 30 dan 100 koloni dihitung terpisah. (Lihat juga teknik standar: Membuat pengenceran serial).

 Inokulasi menggunakan pipet Pasteur 
Setiap saat, memegang pipet sebagai masih mungkin.

1. Kendurkan sebuah steker tutup / kapas dari botol berisi inokulum.
2. Lepaskan Pasteur pipet steril dari wadah, pasang dot terus di tangan kanan Anda.
3. Angkat tabung botol / uji yang mengandung inokulum dengan tangan kiri.
4. Lepaskan steker wol tutup / katun dengan jari kelingking tangan kanan Anda.
5. Api e botol / test leher tabung.
6. Remas bola dot dari pipet sangat sedikit. Masukan pipet ke dalam tabung botol / tes dan menyusun volume yang diperlukan dari budaya. Jangan memencet bola dot dari pipet setelah itu dalam kaldu karena hal ini dapat menyebabkan gelembung dan mungkin aerosol.
7. Lepaskan pipet dan api leher tabung botol / test lagi. Ganti steker wol tutup / kapas.
8. Tempatkan tabung botol / test di bangku cadangan atau di rak nya.

Inokulasi cawan petri

1. Angkat sebuah tutup cawan petri sedikit dengan tangan kanan dan masukkan pipet ke dalam cawan petri. Dengan lembut melepaskan volume yang dibutuhkan inokulum ke tengah piring. Ganti tutupnya.
2. Letakkan pipet ke dalam panci buang.
3. Menambahkan inokulum ke pour plate
4. Menuangkan piring
5. Kumpulkan sebuah botol agar-agar cair steril dari air mandi (catatan 1 dan 2).
6. Pegang botol di tangan kanan Anda. Lepaskan tutup dengan jari kelingking tangan kiri Anda.
7. Api leher botol.
8. Angkat tutup cawan Petri sedikit dengan tangan kiri dan tuangkan agar-agar cair steril ke dalam cawan Petri. Ganti tutupnya.
9. Api e leher botol dan mengganti tutup.
10. Buka botol, api leher botol, tuangkan usia cair steril ke dalam cawan Petri
11. kompas menunjukkan utara selatan timur barat
12. Pindahkan piring lembut untuk mencampur budaya dan menengah dengan cermat dan untuk memastikan bahwa media mencakup pelat merata (catatan 3). Pindahkan piringan dalam tiga arah: NS pertama, kemudian NW-SE, maka NE-SW, atau memutar itu sampai menengah dan inokulum campuran yang baik dan menutupi dasar piring.
13. Biarkan piring untuk memperkuat.
14. Tape  piring tertutup dan menetaskan dalam posisi terbalik.